Анализ ИФА на сифилис: применение и расшифровка результатов

Анализ ИФА на сифилис определяет все формы данного заболевания. Сифилисом называют венерическое заболевание. Чем раньше выявить эту патологию, тем результативнее может стать лечение без каких-либо неприятных осложнений.

Преимущества и недостатки метода

Среди всех современных методов диагностики ИФА является самым инновационным и технически точным. Его основными преимуществами являются:

  1. Способность поиска всех существующих антител к инфекционным заболеваниям в крови пациента.
  2. Высокая доступность метода исследования. На сегодняшний день анализы методом ИФА может выполнить любая лаборатория среднего масштаба.
  3. Практически 100% специфичность и чувствительность метода.
  4. Возможность поиска антител и антигенов, а также установление стадии патологического процесса и отслеживание его динамики, благодаря сравнению количества.

Такое количество преимуществ перед другими анализами полностью затмевает один-единственный недостаток анализа: он способен выявлять антитела, но не самого возбудителя.

Применение метода ИФА

Основой данного метода является связь антигена с антителом, которую выявляют с помощью фермента. Ученые пришли к такому выводу, что ИФА можно использовать в качестве диагностики различных заболеваний, в том числе и сифилиса. Это было действительно важное открытие в медицине. Но использовать данный метод начали лишь в восьмидесятых годах в тех учреждениях, которые были хорошо оснащены медицинским оборудованием.

Первыми счастливчиками, которые получили иммуноферментные анализаторы, стали пункты по приему крови, стационары, занимающиеся лечением венерологических заболеваний и иных инфекций.

В настоящее время уже нельзя представить современную медицину без такого исследования, как ИФА. Можно сказать, что этот анализ задействован почти во всех медицинских отраслях. Это подтверждается тем, что при его использовании можно выявить злокачественное новообразование на самых ранних стадиях.

С помощью ИФА определяют предполагаемые воздействия новых лекарственных препаратов на человеческий организм. Также этот метод применяют и в ветеринарии. Иммуноферментный анализ очень чувствителен.

При взятии венозной крови можно узнать:

Применение метода ИФА
  • уровень гормонов в организме;
  • наличие многих вирусных инфекций, а также присутствие бактерий;
  • постороннюю активность микроорганизмов в теле пациента, которые вызвали воспалительный процесс.

Методом ИФА можно узнать не только присутствие того или иного возбудителя, но его количество в организме пациента. От этого показателя зависит исход лечения, а также возникновение дальнейших осложнений.

Каким образом ИФА в силах охватить такой широкий спектр отраслей и выявлять присутствие разнообразных вредоносных микробов, несущих смертельный вред человеческому организму? Все очень просто. ИФА делят на множество вариантов. Именно они и справляются с определенной задачей. Чтобы выявить различного рода антитела, пользуются специальной планшетной панелью с 96 лунками. В каждом углублении располагаются пептиды, которые при встрече с антителом реагируют изменением цвета.

Читайте также:  Как происходит заражение и лечение трихомониаза у женщин

Данный анализ осуществляется на определенных системах, которые полностью оснащены всем необходимым, только основную часть работы приходится проделывать вручную. Если говорить о полных автоматах, то здесь все делает машина. Лаборант освобожден от этого тяжкого труда. Только не каждая лаборатория способна обеспечить себя данным устройством, так что приходится продолжать рутинную работу на полуавтоматах.

Трактовкой результатов дано заниматься только опытному доктору. Это связано с тем, что некоторые реакции дают ложные суждения, разобраться в которых не в силах обычному специалисту.

Иммуноанализ сэндвич-типа Sandwich-type immunoassay

Рис. 2. Схематическое изображение иммуноанализа «сэндвич»-типа. АТп — антитело подложки, АТд — детекторное антитело, АГ — антиген, М — метка, ковалентно связанная с детекторным антителом, П — подложка, на которую сорбируется антитело подложки.

В данном варианте иммуноанализа (Рис.2) используется пара антител, специфичных к пространственно удаленным эпитопам исследуемого антигена.

I. Сорбция антител подложки

В лунки 96-луночного планшета для проведения иммуноанализа сорбируют антитела подложки 1-2 мкг в лунку в 100 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS). Инкубация проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка (2-х кратная) несвязавшихся молекул антигена осуществляется фосфатно-солевым буфером содержащим 0,1% Tween-20 (PBSТ).

II. Блокировка

Для блокирования мест неспецифичного связывания лунки планшета заполняют PBST и инкубируют в течение 10-15 минут при комнатной температуре.

III. Инкубация с антигеном

В лунки планшета с преадсорбироваными антителами вносят по 50 мкл исследуемого раствора либо стандартных разведений антигена. Разведения антигена должны быть приготовлены на основе PBST, поскольку Tween-20 снижает неспецифичное связывание белковых молекул друг с другом и с поверхностью планшета. И исследуемый раствор, и стандартные разведения антигена вносят попарно (либо по 3 повторности), используя по две (три) лунки на каждое разведение белка. Инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Отмывка осуществляется раствором PBST 3 раза.

Иммуноанализ сэндвич-типа Sandwich-type immunoassay

IV. Инкубация с антителами, конъюгированными с ферментной меткой

В лунки планшета вносят по 100 мкл раствора специфичных антител, конъюгированных с ферментной меткой. Оптимальная концентрация конъюгированных антител как правило указывается производителем (обычно используют концентрацию 2-4 мкг/мл). Инкубация с антителами, содержащими ферментную метку, проводится в течение 30 минут при комнатной температуре и встряхивании на горизонтальном шейкере для планшетов. Отмывка осуществляется с помощью PBSТ 5-6 раз.

V. Проведение ферментативной реакции, сопровождающейся появлением окрашенного продукта

В лунки вносят по 100 мкл раствора субстрата и инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре и постоянном перемешивании.

VI. Остановка ферментативной реакции

Перед измерением оптической плотности проводят остановку цветной реакции с помощью 0,5 М H2SO4. В лунки с рабочим раствором ОФД после инкубации вносят по 50 мкл раствора 0,5 М серной кислоты. После этого можно сразу приступать к измерению оптической плотности.

Читайте также:  Как вылечить молочницу у женщин, мужчин и детей?

VII. Измерение оптической плотности

Оптическая плотность раствора окрашенного продукта измеряется при λ=490 нм с использованием планшетного спектрофотометра.

Версия для печати

Разновидности ИФА

Анализ ИФА имеет следующие разновидности:

  1. Непрямой.
  2. Прямой.
  3. Конкурентный.
  4. Метод блокирования.

Но на деле сегодня применяется только способ под названием ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). В его основе лежит вышеописанная реакция образования комплекса антигена с антителом с изменением окраски на поверхности лунки.

Отдельного внимания заслуживает непосредственно количественный ИФА-анализ крови. Это не разновидность анализа, а способ оценки результатов. Благодаря ему подсчитывается количество антител и определяются их классы. Результат зависит от оптической плотности пробы, тест-системы, на которой выполнялся анализ ИФА, а также от лаборатории.

Какие заболевания выявляются с помощью ИФА-диагностики?

1. Инфекционные заболевания1.1 Вирусные гепатиты А (IgM, G), В антигены -HBsAg, HBeAg, антитела — IgM HBcorAg, Ig суммарные HBcorAg, IgG HBeAg), С (антитела Ig M, G HCV), D (IgM, G), E (Ig M, G) и другие.1.2 ВИЧ-инфекция (IgG)1.3 Цитомегаловирусная инфекция (антитела IgM, G)1.4 Эпштейн-Барр инфекция или мононклеоз (антитела IgM, G к EA, VCA, NA белкам вируса)1.5 Герпетические инфекции (антитела IgM, G)1.6 Токсоплазмоз (антитела IgM, G)1.7 Краснуха (IgM, G)1.8 Корь (IgM, G), Бруцеллез (IgM, G), Псевдотуберкулез (IgM, G), Салмонеллез (IgM, G), Шигеллез или дизентерия (IgM, G), Аспергиллез (IgM, G), Клещевой энцефалит, Боррелиоз и многие другие.1.9 Паразитозы (лямблиоз, токсокароз, трихинеллез, описторхоз, эхинококкоз, альвеококкоз и другие), при которых выявляются ЗППП (заболевания, передающиеся половым путем) – Микоплазмоз (IgM, G), Уреаплазмоз (IgM, G), Хламидиоз (IgA, M, G), Сифилис (IgG) Хеликобактерная инфекция (IgG)

2. Маркеры аутоиммунных заболеваний и показатели иммунитета человека (общий IgE, общий IgG, общий IgA, общий IgM, общий IgD, секреторный IgA, IgG 2, IgG4, ЦИК-циркулирующие иммунные комплексы, IgA и IgG к глиадину и другие)

3. Онкологичсекие маркеры (ФНО – фактор некроза опухоли, РЭА – раково-эмбриональный антиген, ПСА – простатспецифический антиген, ХГ – хорионический гонадотропин, СА 125, альвеомуцин и многие другие)

4. Репродуктивные нарушения (эстрадиол, прогестерон, пролактин, тестостерон, АФП- альфафетопротеин, ФСГ – фолликулостимулирующий гормон и другие)

5. Заболевания щитовидной железы (свободные и связанные Т3, Т4, тиреоглобулин, тиреопероксидаза – ТПО, тиреотропный гормон — ТТГ).

Данный список представлен далеко не всеми заболеваниями, которые диагностируются с помощью иммуноферментного анализа.

Данные изменений нормального уровня лютеинизирующего полового гормона в таблице

Кол-во днейУровень гормона
1-12 день 12-14 мЕд/л
12-14 день 24-150 мЕд/л
С 15 дня до начала нового цикла 2-17 мЕд/л

Топовая статья: Что можно выявить используя мазок у женщин?

Анализ даёт возможность выявить разные виды антител в организме, которые показывают себя на каждом этапе развития болезни. Когда недуг только дал о себе знать, активно вырабатываются антитела класса IgM. Если их удалось обнаружить, значит, возникло какое-то заболевание.

Читайте также:  Увеличенные лимфоузлы в паху: причины, симптомы, терапия

После выработки IgM начинается производство IgG свидетельствующее о том, что человек либо является носителем инфекции, либо он недавно переболел чем-то инфекционным. Обычно выявить IgG можно после 3-4 недель, отсчитывая от начала развития IgM, но некоторые антитела могут находиться в организме годами.

Есть ещё такой класс антител, как IgA, который свидетельствует о наличии в организме хронической инфекции. При его обнаружении начинается незамедлительное лечение, а после этого ещё раз сдаётся анализ крови ИФА, дабы убедиться, что лечение принесло свои плоды.

Немного иначе ситуация обстоит с детьми в возрасте до полутора лет, в организме которых на первых этапах жизни для обеспечения надёжной защиты от вирусов в большом числе присутствуют антитела IgG. Поэтому при проверке малышей основное внимание уделяют классу IgM.

Ниже представлена таблица, в которой указаны комбинации наличия или отсутствия инфекции.

Показания к назначению и выявляемые заболевания методом ИФА

Анализ крови на иммуноферментный анализ показано проводить при подозрении на возникновение следующих патологий:

  • онкология;
  • вирусные гепатиты (при всех типах вируса);
  • герпетические поражения слизистой или кожи;
  • некоторые инфекционные процессы (сальмонеллез, корь, энцефалит, дизентерия);сифилис;
  • инфекции, передающиеся половым путем (гонорея, хламидиоз, микоплазмоз и др.);
  • атопические процессы (аллергии);
  • цитомегаловирус;
  • эндокринные сбои;
  • иммунодефицит;
  • бесплодие;
  • глистные инвазии.

Также ИФА анализ крови позволяет спрогнозировать течение некоторых неинфекционных заболеваний:

  • инфаркта;
  • инсульта;
  • неврологических расстройств;
  • почечных патологий.

Также с профилактической целью проводят ИФА во время медосмотров.

Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.

Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных охватить полный список показаний к проведению ИФА.

Вот наиболее распространенные цели анализа:

  • диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний: IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С; IgG к ВИЧ; Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции; Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр; Ig M и IgG к герпетическим инфекциям; Ig M и IgG к токсоплазмозу;
  • Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям; IgG к паразитарным заболеваниям; Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем; IgG к хеликобактерной инфекции. Общая оценка показателей иммунитета человека и маркёров некоторых аутоиммунных заболеваний. Выявление онкологических маркёров (фактора некроза опухоли, простатспецифического антигена, раково-эмбрионального антигена и других). Определение содержания гормонов в сыворотке крови (прогестерона, пролактина, тестостерона, тиреотропного гормона и других).